|
КЛЕТОЧНЫЕ КУЛЬТУРЫ
Информационный бюллетень. Выпуск 25 (2010) |
|
УДК 576.3, 576.4, 576.5, М 54
| Вып. 26 | 2010 | 1-79 | pdf | ОСНОВНЫЕ НАПРАВЛЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ НА КЛЕТОЧНЫХ КУЛЬТУРАХ В УЧРЕЖДЕНИЯХ РОССИИ РОЛЬ ИММОБИЛИЗОВАННЫХ БЕЛКОВ ВНЕКЛЕТОЧНОГО МАТРИКСА В КАРИОТИПИЧЕСКОЙ ИЗМЕНЧИВОСТИ "БЕЗМАРКЕРНЫХ" КЛЕТОЧНЫХ ЛИНИЙ
Показано существенное влияние иммобилизованных белков внеклеточного матрикса (ВКМ) - ламинина и фибронетина, на характер кариотипической изменчивости в "безмаркерных" клеточных линиях разного происхождения (эпителиоподобные и фибробластоподобные). Установлено, что характер количественной кариотипической изменчивости не зависит, а характер структурной изменчивости зависит от происхождения линии. Показано также, что конкретная структура кариотипа вносит определенные коррективы в характер кариотипической изменчивости, обеспечивая способ адаптации клеточной культуры к определенному субстрату. Полученные результаты существенно расширили представления о важности иммобилизованных белков ВКМ для жизнедеятельности клеток, ибо изменения кариотипической структуры неразрывно связаны с нарушением функционирования генов, что может привести к изменению разных клеточных свойств. Ключевые слова: кариотипическая изменчивость, клеточная линия, белки внеклеточного матрикса, ламинин, фибронектин, структурный вариант кариотипа, хромосомные аберрации | Вып. 25 | 2010 | 3-14 | pdf | ПРОДУКЦИЯ IgM И J ЦЕПИ B-ЛИМФОБЛАСТОИДНЫМИ КЛЕТОЧНЫМИ ЛИНИЯМИ М.П. Самойлович, А.А. Пиневич, Н.Л. Вартанян, В.Б. Климович Российский научный центр радиологии и хирургических технологий, Санкт-Петербург; mpsamoylovich@gmail.com Характерной чертой B-лимфобластоидных клеточных линий является продукция связанных с мембраной или секретируемых иммуноглобулинов (Ig). Многие линии секретируют молекулы IgM, в состав которых обычно входит полипептид - J цепь. В клетках J цепь участвует в сборке пентамерных молекул IgM, при отсутствии или недостаточной экспрессии J цепи клетки синтезируют гексамеры. Гексамерные молекулы IgM, в отличие от пентамерных, не способны связываться с рецептором полимерных иммуноглобулинов (pIgR) эпителиальных клеток и формировать секреторный IgM. Обнаружение J цепи в цитоплазме или в среде культивирования позволяет судить о том, какой из вариантов полимерных молекул IgM синтезируют клетки. Задача работы состояла в изучении продукции IgM и J цепи клетками линий Namalva, NC-37, RPMI 1788 и Raji, представленных в Российской коллекции клеточных культур позвоночных. В исследовании использованы методы иммуноферментного анализа (ИФА) и проточной цитофлуориметрии, разработанные на основе созданных в лаборатории моноклональных антител против мю-цепей и против J цепи. В культурах линии RPMI 1788 обнаружена широкая вариабельность содержания внутриклеточного IgM, при этом менее одной трети клеток экспрессирует J цепь. В среде культивирования линии RPMI 1788 выявлена высокая концентрация IgM, большая часть которого не имеет J цепи. Клеточные популяции Namalva и NC-37 однородны по содержанию как IgM, так и J цепи. Для этих линий характерен низкий уровень секреции IgM. В среде культивирования клеток Namalva и NC-37 доминируют молекулы IgM, содержащие J цепь. Клетки линии Raji экспрессируют J цепь, но не секретируют IgM в среду культивирования. Полученные данные позволяют заключить, что линии Namalva и NC-37 синтезируют пентамеры IgM, а линия RPMI 1788 гетерогенна и является продуцентом преимущественно гексамерной формы IgM. Ключевые слова: IgM, J цепь, Namalva, NC-37, RPMI 1788, Raji | Вып. 25 | 2010 | 15-24 | pdf | ПОЛУЧЕНИЕ, ХАРАКТЕРИСТИКА И ПРИМЕНЕНИЕ ПОСТОЯННОЙ КЛЕТОЧНОЙ ЛИНИИ ICO ЯИЧНИКОВ НЕПОЛОВОЗРЕЛОГО КАРПА, CYPRINUS CARPIO Т.И. Щелкунова, И.С. Щелкунов Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии, г. Покров, Владимирская обл.; shchelkun@yahoo.com Приводятся данные о получении, морфологической и кариологической характеристиках, параметрах культивирования, видовой принадлежности, использовании для выявления вируснейтрализующих антител у рыб и спектра чувствительности к ихтиовирусам постоянной линии клеток ICO яичников неполовозрелого карпа. Ключевые слова: постоянная линия клеток, карп, характеристика | Вып. 25 | 2010 | 24-36 | pdf | СТВОЛОВЫЕ КЛЕТКИ: ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ В ФУНДАМЕНТАЛЬНОЙ КЛЕТОЧНОЙ БИОЛОГИИ И МЕДИЦИНЕ
Белки внеклеточного матрикса являются необходимым компонентом микроокружения мезенхимных стромальных клеток (МСК). Исследование адгезивных взаимодействий МСК с матриксом необходимо для понимания механизмов регуляции пролиферации и дифференцировки МСК и важно для дальнейшего развития клеточной терапии. Целью этого исследования был анализ влияния некоторых белков внеклеточного матрикса (коллаген I типа, фибронектин и ламинин) на клональный рост и остеогенные потенции МСК, полученных из костного мозга половозрелых крыс и печени зародышей крыс. Было обнаружено, что для обоих источников доля колониеобразующих единиц фибробластов (КОЕ-Ф), прикрепившихся за первые 7 дней инкубации, существенно выше на фибронектиновом и коллагеновом покрытии по сравнению с обычным пластиковым покрытием. Влияние ламинина на адгезию КОЕ-Ф выражено в меньшей степени. Анализ экспрессии щелочной фосфатазы, маркирующей ранние стадии остеогенной дифференцировки, указывает на сниженный остеогенный потенциал костномозговых КОЕ-Ф на фибронектине по сравнению с пластиком, коллагеном I типа и ламинином. Доля остеогенных клеток среди КОЕ-Ф зародышевой печени крайне низка независимо от присутствия белков внеклеточного матрикса. Анализ терминальной дифференцировки костномозговых МСК в остеогенной среде показал подавляющий эффект фибронектина на отложение кальция в остеогенных узелках. Коллаген I типа и ламинин существенного эффекта на остеогенную дифференцировку в данной экспериментальной системе не оказывали. Изучение молекулярных механизмов обнаруженных явлений представляется перспективной темой для дальнейших исследований. Ключевые слова: мезенхимные стромальные клетки, колониеобразующие единицы фибробластов, остеогенез, адгезия, белки внеклеточного матрикса, коллаген I типа, ламинин, фибронектин | Вып. 25 | 2010 | 37-47 | pdf | HLA-АНТИГЕННАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА НАТИВНЫХ И КУЛЬТИВИРУЕМЫХ НЕЙРОКЛЕТОК ФЕТАЛЬНОГО И ПОСТНАТАЛЬНОГО ГОЛОВНОГО МОЗГА ЧЕЛОВЕКА Л.Д. Любич, Н.И. Лисяный, В.М. Семенова, Л.П. Стайно ГУ "Институт нейрохирургии им. акад. А.П. Ромоданова АМН Украины", Киев; Liubichld@mail.ru Целью исследования было изучение экспрессии антигенов главного комплекса гистосовместимости (major histocompatibility complex - MHC или human leucocyte antigens - HLA) нативными и культивируемыми нейроклетками (НК) головного мозга человека разного срока гестации (англ. gestation - период беременности) и различной степени дифференциации на протеиновом уровне и на уровне мРНК с помощью методов иммунофенотипирования и RT-PCR. От уровня экспрессии антигенов HLA на трансплантированных НК зависит способность иммунокомпетентных клеток реципиента распознавать клетки трансплантата и индукцировать специфический ответ, приводящий либо к приживлению, либо к отторжению трансплантата. Установлено, что доля HLA-A,B,C- и HLA-DR-экспрессирующих клеток была наименьшей среди нейроклеток человека 5-й недели гестации, постепенно возрастая к 8-9-й неделе гестации. Экспрессия исследованных аллелей мРНК HLA-A1, и особенно, HLA-DRa1, возрастает от полного отсутствия или незначительных количеств у НК человека 5-9-й недели гестации (нейральных стволовых клеток - НСК и нейральных прогениторных клеток - НПК) до частичной экспрессии у регионарных НСК зрелого мозга (клеток ольфакторной луковицы) и до значительной экспрессии в клетках белого вещества, и, особенно, серого вещества зрелого мозга. В процессе культивирования НК человека 5-9 недели гестации в среде DMEM+ретинола ацетат происходит снижение количества и доли клеток, экспрессирующих антигены HLA І и ІІ класса как на протеиновом уровне, так и на уровне мРНК, тогда как присутствие в среде факторов роста FGF и EGF способствует сохранению (FGF) или нарастанию (EGF) количества таких клеток. При культивировании в DMEM количество клеток ольфакторной луковицы, экспрессирующих антигены гистосовместимости І и ІІ класса, снижается с 10-х по 20-е сутки. Ключевые слова: нейроклетки, ольфакторная луковица, белое и серое вещество головного мозга, антигены HLA, иммунофенотипирование, экспрессия мРНК | Вып. 25 | 2010 | 47-59 | pdf | КЛЕТОЧНАЯ БИОТЕХНОЛОГИЯ И ТКАНЕВАЯ ИНЖЕНЕРИЯ
В настоящем кратком обзоре суммированы данные литературы и собственные данные о действии внеклеточных гистонов на функции различных типов клеток. Рассмотрены перспективы создания транспортных систем на основе гистонов для целенаправленной доставки лекарственных средств, которые самостоятельно не проходят через клеточные мембраны и тканевые барьеры. Исследована возможность использования гистонов, иммобилизованных на микросферах, для модификации поверхностей, предназначенных для культивирования клеток. Показано, что гистоны, иммобилизованные на микросферах и нанесенные на поверхность культуральных сосудов, способствуют адгезии культивируемых клеток разного происхождения, их пролиферации и формированию сети клеточных структур за счет образования межклеточных контактов и одновременного взаимодействия клеток с несколькими микросферами. Рассматривается возможность использования подобных микросфер в качестве компонентов при создании трехмерных пористых матриц, предназначенных для формирования в них тканеподобных клеточных структур in vitro. Ключевые слова: внеклеточные гистоны, конъюгаты лекарственных средств с белками-носителями, микросферы, адгезия, пролиферация культивируемых клеток | Вып. 25 | 2010 | 59-70 | pdf | МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
После 5 пассажей в малосывороточной рисовой среде были получены адаптированные к росту в этой среде клетки линии МДСК. У этих клеток наблюдалась более низкая пролиферативная активность и изменение морфологии по сравнению с контролем. При этом сохранялась жизнеспособность клеток и активность репродукции вируса гриппа А (H1N1 и Н3N2). Для адаптации клеток МДСК к полностью бессывороточной среде "Гибрис-2" потребовалось 17 серийных пассажей. У адаптированных клеток также наблюдалась пониженная пролиферативная активность и изменение морфологии. Репродукция вирусов гриппа А (H1N1 и Н3N2) была ниже на 0,5 lgТЦД50 по сравнению с контролем, но вирус гриппа В активно размножался в адаптированных и контрольных клетках. Следовательно, как рисовая среда, так и среда "Гибрис-2" пригодны для культивирования клеток линии МДСК и могут применяться для репродукции вирусов гриппа. Ключевые слова: клетки, адаптация, рисовая среда, бессывороточная среда, репродукция вирусов гриппа | Вып. 25 | 2010 | 70-74 | pdf | Х Р О Н И К А КОНФЕРЕНЦИИ И ШКОЛЫ, ПРОВЕДЕННЫЕ В 2009 ГОДУ 1. Традиционный симпозиум по биологии клетки в культуре на тему "Культивируемые
клетки как основа клеточных технологий" был проведен в Санкт-Петербурге в Институте цитологии РАН в октябре 2009 года.
Помимо устных докладов и стендовых сообщений в рамках симпозиума прошло общее собрание членов Ассоциации специалистов по клеточным культурам.
Кроме того, в рамках симпозиума состоялась демонстрация новых конфокальных микроскопов, производимых фирмой Olimpus и компанией Karl Zeis.
2. В декабре 2009 года в Научном центре РАН в Санкт-Петербурге состоялась Международная конференция "Инновационный потенциал фундаментальных наук и проблемы его реализации". На конференции с докладом на тему "Создание клеточных технологий и их применение" выступил президент АСК, д.б.н., проф. Г.П. Пинаев. 3. В марте 2010 года в НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН в Москве состоялись Практические курсы по культивированию клеток. В программу курсов были включены следующие темы: культивирование перевиваемых клеточных линий человека и животных; чувствительность клеточных линий к различным родам вирусов; определение контаминаций клеток микоплазмой и др. КОНФЕРЕНЦИИ 2010
Р А З Н О Е Вышла из печати книга: "Животная клетка в культуре" (Методы и применение в биотехнологии) под общ. ред. д.б.н., проф. Дьяконова Л.П., М.: издательство "Спутник", 2009, 656 с. - издание второе, дополненное. ИНФОРМАЦИЯ АССОЦИАЦИИ СПЕЦИАЛИСТОВ ПО КЛЕТОЧНЫМ КУЛЬТУРАМ РЕШЕНИЯ СОВЕЩАНИЯ ЧЛЕНОВ АССОЦИАЦИИ СПЕЦИАЛИСТОВ ПО КЛЕТОЧНЫМ КУЛЬТУРАМ 13 ОКТЯБРЯ 2009 Г. 13 октября 2009 г. в Институте цитологии РАН (Санкт-Петербург) состоялось очередное совещание членов Ассоциации специалистов по клеточным культурам (АСКК), принимавших участие в проведении симпозиума "Культивируемые клетки как основа клеточных технологий". После обсуждения ряда проблем, касающихся научной и практической деятельности членов АСКК, были приняты следующие решения:
С 2010 г. редакция бюллетеня будет помещать на сайте Института цитологии РАН полную электронную версию всех последующих выпусков бюллетеня, а также резюме и ключевые слова опубликованных в них статей на английском языке. НОВЫЕ ПРАВИЛА ДЛЯ АВТОРОВ Статьи принимаются редакцией в электронном варианте и в рукописи. Электронный вариант статьи высылается в редакцию по электронной почте в виде отдельного файла (вместе с рисунками и таблицами) в формате Microsoft Word для Windows. При создании файла необходимо соблюдать следующие требования:
Адрес редакции:
Отв. редактору Инф. бюлл. "Клеточные культуры" М.С. Богдановой Тел.: (812) 297-53-10, 8-911-284-28-64; факс: (812) 297-03-41, 297-42-96 Электронный адрес: msb2051@rambler.ru В ссылках на литературу в тексте статьи указываются в круглых скобках номера работ в порядке их цитирования. В конце статьи приводится список литературы, который должен содержать библиографическое описание всех работ, ссылки на которые имеются в тексте статьи. Необходимо выделять жирным шрифтом фамилии и инициалы всех авторов цитируемой публикации. Для книг указываются фамилии и инициалы авторов, год издания, название книги, место издания, издательство и общее число страниц. Все присланные в редакцию статьи проходят рецензирование и только после получения положительных рецензий публикуются. |
"Клеточные культуры" Главная |