КЛЕТОЧНЫЕ КУЛЬТУРЫ Информационный бюллетень. Выпуск 27 (2011)

УДК 576.3, 576.4, 576.5, 576.8.097, М-54 Клеточные культуры. Информационный бюллетень. Выпуск 27. Отв. ред. М.С. Богданова. – СПб: Изд-во Политехн. ун-та, 2011. – 94 с. ISSN 2077-6055 | Вып. 27 | 2011 | 1–94 | pdf | Настоящий выпуск содержит информацию об основных направлениях фундаментальных и прикладных исследований на клеточных культурах, о новых методах, о научных совещаниях, школах и конференциях. Сборник "Клеточные культуры" (Информ. Бюллетень) предназначен для широкого круга исследователей, работающих в области клеточной биологии, биотехнологии, вирусологии и медицины. О Г Л А В Л Е Н И Е Основные направления исследований на клеточных культурах в учреждениях России Смирнова Т.Д., Даниленко Д.М., Гудкова Т.М., Писарева М.М., Кадырова Р.А., Слита А.В. Влияние различных инфицирующих доз вирусов гриппа А на пролиферацию перевиваемых клеток человека. pp. 3–12. Щелкунова Т.И., Щелкунов И.С. Получение и свойства двух постоянных линий клеток плавников сибирского осетра, Acipenser baerii. pp. 13–24. Адоева Е.А. Органотипическое культивирование эмбриональной поджелудочной железы крысы. pp. 25–33 Яковлева Т.К., Ярцева Н.М., Турилова В.И. Прогрессия кариотипа клеточных линий острого миелобластного лейкоза человека. pp. 34–45 Литвинчук Л.Ф., Раздольская Н.В., Потапчук М.В., Гаврилова О.В., Иванов А.М. Изучение биологических свойств и криоконсервации паразитического простейшего Trichomonas vaginalis при совместном культивировании с клеточными культурами. pp. 46–58 Стволовые клетки: их использование в фундаментальной клеточной биологии и медицине Семенова В.М., Любич Л.Д., Лисяный Н.И., Главацкий А.Я., Стайно Л.П. Исследование биологических свойств супернатанта прогениторных нейроклеток крыс на культурах глиом головного мозга. pp. 58–68 Разрабатывается проблема Лавров А.В., Вольдгорн Я.И. Особенности расположения хромосом в ядрах мезенхимных стволовых клеток человека при культивировании in vitro. pp. 68–73 Маркарян А.Ю., Бахарев А.А., Устьянцев П.В. Возможности стандартизации клеточных культур с помощью метода генотипирования короткими тандемными повторами. pp. 74–80 Методы исследований Подчерняева Р.Я., Урываев Л.В., Дедова А.В., Дедова Л.В., Ионова К.С., Михайлова Г.Р., Парасюк Н.А., Гринкевич О.М., Селиванова Т.К., Гребенникова Т.В., Петрачев А.Д., Щетвин М.Н. Определение микоплазм и вируса бычьей диареи в коллекционных клеточных линиях. pp. 80–88 Хроника Конференции и школы, проведенные в 2010 году. pp. 89–90 Конференции 2011. pp. 90–91 Разное Правила для авторов ВЛИЯНИЕ РАЗЛИЧНЫХ ИНФИЦИРУЮЩИХ ДОЗ ВИРУСОВ ГРИППА А НА ПРОЛИФЕРАЦИЮ ПЕРЕВИВАЕМЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА Т.Д. Смирнова, Д.М. Даниленко, Т.М. Гудкова, М.М. Писарева, Р.А. Кадырова, А.В. Слита ФГБУ НИИ гриппа Минздравсоцразвития РФ, Санкт-Петербург; cellcultures@influenza.spb.ru      Проведено инфицирование разными дозами вирусов гриппа А/Brisbane/10/07 (H3N2) и А/С.-Петербург/56/09 (H1N1v) 8-ми клеточных линий человека: ECV-304, T-98G, A-172, RD, CaCo-2, HeLa, L-41 и ФЛЭЧ. На третьи сутки после заражения культур вирусами отмечено дозозависимое снижение количества выросших клеток, обнаружены цитопатические изменения в виде мелкоклеточной очаговой деструкции монослоя. При инфицировании культур высокими дозами вирусов в клетках наблюдался апоптоз, причем он наступал раньше, чем проявлялись первые признаки цитопатических изменений. Только в двух клеточных линиях - ECV-304 (эндотелий) и Т-98 G (глиобластома) после заражения низкими дозами вирусов было отмечено усиление пролиферации клеток, которое не сопровождалось индукцией апоптоза. С помощью метода флуоресцирующих антител и полимеразной цепной реакции было показано, что в клетках линии ECV-304, зараженных низкими дозами вируса гриппа А/Brisbane/10/07, на протяжении трех пассажей сохранялась латентная вирусная инфекция: в клетках был выявлен нуклеопротеин вируса и вирусная РНК. Показано, что противовирусные препараты рибавирин, ремантадин и триазавирин снижали пролиферацию перевиваемых клеток эндотелия, стимулированную низкими дозами вируса, что подтверждало специфичность вирусного воздействия на клетки. Результаты проведенных экспериментов свидетельствуют о различном ответе исследуемых клеточных культур на вирусную инфекцию в зависимости от величины заражающей дозы. Обсуждается вопрос о возможной связи инфицирования вирусами гриппа клеток эндотелия и нейроглии больного с развитием у него, впоследствии, сердечнососудистых патологий и заболеваний нервной системы. Ключевые слова:  вирусы гриппа А, перевиваемые клеточные линии человека, пролиферация, апоптоз | Вып. 27 | 2011 | 3–12 | pdf | ПОЛУЧЕНИЕ И СВОЙСТВА ДВУХ ПОСТОЯННЫХ ЛИНИЙ КЛЕТОК ПЛАВНИКОВ СИБИРСКОГО ОСЕТРА, ACIPENSER BAERII Т.И. Щелкунова, И.С. Щелкунов Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии, г. Покров, Владимирская обл.; shchelkun@yahoo.com      Приводятся данные о получении, морфологических особенностях, параметрах культивирования, подтверждении видовой принадлежности и спектре чувствительности к ихтиовирусам постоянных линий клеток SSF-1 и SSF-2 плавников сибирского осетра. Ключевые слова:  сибирский осетр, плавник, постоянная линия клеток, характеристика | Вып. 27 | 2011 | 13–24 | pdf | ОРГАНОТИПИЧЕСКОЕ КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ЭМБРИОНАЛЬНОЙ ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ КРЫСЫ Е.Я. Адоева Военно-медицинская академия им. С.М.Кирова, кафедра биологии, Санкт-Петербург; adoeva@mail.ru      Проведено длительное органотипическое культивирование эмбриональной поджелудочной железы крысы. В органных культурах эмбриональной поджелудочной железы крысы происходит перестройка ацинусов в эпителиальные трубки. Эпителиоциты выводных протоков и эпителиальных трубок активно делятся и претерпевают процесс вторичной секреторной дифференцировки. Можно считать, что образование инсулоцитов в органных культурах эмбриональной поджелудочной железы крысы происходит в результате следующих процессов: 1) дифференцировки отдельных эпителиоцитов в составе эпителиальных трубок; 2) пролиферации эндокринных клеток; 3) ацино-инсулярной трансформации эпителия. Ключевые слова:  органные культуры, ацинус, инсулоцит, пролиферация клеток, вторичная дифференцировка, выводные протоки, эпителиальные трубки, ацино-инсулярная трансформация | Вып. 27 | 2011 | 25–33 | pdf | ПРОГРЕССИЯ КАРИОТИПА КЛЕТОЧНЫХ ЛИНИЙ ОСТРОГО МИЕЛОБЛАСТНОГО ЛЕЙКОЗА ЧЕЛОВЕКА Т.К. Яковлева, Н.М. Ярцева, В.И. Турилова Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург; tyak@mail.cytspb.rssi.ru      Клеточные линии опухолевого происхождения широко используются в разных областях биологии и медицины, в основном, в качестве моделей для изучения различных аспектов онкогенеза. В процессе культивирования клеточных линий происходят изменения кариотипа клеток, которые могут приводить к изменению их тканеспецифических и опухолеспецифических свойств. Роль тканеспецифических механизмов онкогенеза в кариотипической изменчивости опухолевых клеток в культуре остается малоизученной. Цель работы состояла в изучении характера кариотипической изменчивости клеточных линий острого миелобластного лейкоза (ОМЛ) с опухолеспецифической перестройкой в кариотипе - делецией длинного плеча хромосомы 5, del(5q).      Анализ кариотипов клеточных линий GF-D8, UoC-M1, HL-60, KG-1, KG-1a и SAML-2 был выполнен по данным литературы. Показано, что в прогрессии кариотипа клеточных линий ОМЛ основную роль играет структурная кариотипическая изменчивость. В клеточных линиях выявлены характерные для ОМЛ in vivo структурные перестройки хромосом 5, 7, 8, 11 и 17. Вовлечение нормальных хромосом в новые реаранжировки при прогрессии кариотипа клеток в условиях in vitro также имеет опухолеспецифический характер. Отмечен особый характер структурных перестроек, приводящих к увеличению дозы генов MYC и MLL: экстракопирование фрагментов хромосом, содержащих опухолеспецифические реаранжировки хромосомного материала. Преимущественное вовлечение определенных хромосом в структурные перестройки и специфический характер этих перестроек обеспечивают поддержание и углубление хромосомного дисбаланса в клеточных линиях ОМЛ с del(5q) в кариотипе при длительном культивировании.      В целом полученные данные свидетельствуют о сходном характере кариотипической изменчивости клеточных линий ОМЛ с del(5q) в процессе длительного культивирования. Показано, что использованный подход - анализ группы клеточных линий с определенной опухолеспецифической перестройкой в кариотипе - позволяет исследовать направленность и особенности кариотипической изменчивости опухолевых клеток в культуре. Ключевые слова:  острый миелобластный лейкоз, клеточные линии GF-D8, UoC-M1, HL-60, KG-1, KG-1a, SAML-2, делеция 5q, кариотипическая изменчивость | Вып. 27 | 2011 | 34–45 | pdf | ИЗУЧЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ И КРИОКОНСЕРВАЦИИ ПАРАЗИТИЧЕСКОГО ПРОСТЕЙШЕГО TRICHOMONAS VAGINALIS ПРИ СОВМЕСТНОМ КУЛЬТИВИРОВАНИИ С КЛЕТОЧНЫМИ КУЛЬТУРАМИ Л.Ф. Литвинчук 1, Н.В. Раздольская 2, М.В. Потапчук 1, О.В. Гаврилова 2, А.М. Иванов 2 1 ФГБУ "НИИ гриппа" Минздравсоцразвития России, 2 Военно-Медицинская академия им. С.М. Кирова, Санкт-Петербург; office@influenza.spb.ru      В настоящем исследовании дана краткая характеристика простейшего Trichomonas vaginalis (Т.V.), важнейшего патогена человека, входящего в структуру инфекций, передающихся половым путем. Как следует из данных литературы, методы длительного сохранения организмов такого типа несовершенны и ограничены в сроках хранения. По существу, отсутствуют современные технологии для долгосрочной консервации подобных объектов в условиях глубокого замораживания. В задачи настоящей работы входило получение модели "паразит-хозяин" in vitro для последующего накопления достаточного количества жизнеспособных и активных простейших и, на основе техники криоконсервации клеточных культур, проведение глубокого замораживания накопленной популяции трихомонад. Было подготовлено и криоконсервировано 6 штаммов Т.V., полученных от больных трихомониазом. При консервации в жидком азоте в течение 2-х лет все штаммы сохранили подвижность, характерную морфологию и способность инициировать инфекционный процесс на клеточных культурах. Ключевые слова:  культивирование Trichomonas vaginalis, криоконсервация, криопротекторы, глубокое замораживание простейших, криобанки | Вып. 27 | 2011 | 46–58 | pdf | ИССЛЕДОВАНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ СУПЕРНАТАНТА ПРОГЕНИТОРНЫХ НЕЙРОКЛЕТОК КРЫС НА КУЛЬТУРАХ ГЛИОМ ГОЛОВНОГО МОЗГА В.М. Семенова, Л.Д. Любич, Н.И. Лисяный, А.Я. Главацкий, Л.П. Стайно ДУ "Институт нейрохирургии им. акад. А.П.Ромоданова АМН Украины", Киев; seveme22@rambler.ru      Исследовано влияние супернатанта (фактора) прогениторных нейроклеток (ФНК) из фетального мозга крысы (Е12-16) на активность роста глиальных опухолей головного мозга человека в условиях культивирования. Зарегистрирован дозозависимый цитотоксический эффект воздействия ФНК на опухолевые клетки культивируемых глиом после его 24-часовой инкубации с культурами. Воздействие ФНК индуцирует дистрофические и некробиотические изменения в опухолевых клетках культур с нарушением общей структуры зоны роста, нарастающие при увеличении тестируемой концентрации ФНК и удлинении срока инкубации до 48 часов. Наиболее выраженный эффект противоопухолевого влияния ФНК наблюдается в культурах глиобластом - самых злокачественных глиом головного мозга. Ключевые слова: прогениторные нейроклетки мозга крысы, супернатант, фактор нейроклеток, культуры глиом головного мозга человека, анапластические астроцитомы, глиобластомы | Вып. 27 | 2011 | 58–68 | pdf | ОСОБЕННОСТИ РАСПОЛОЖЕНИЯ ХРОМОСОМ В ЯДРАХ МЕЗЕНХИМНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА ПРИ КУЛЬТИВИРОВАНИИ IN VITRO А.В. Лавров, Я.И. Вольдгорн Учреждение Российской академии медицинских наук Медико-генетический научный центр РАМН, Москва; avlavrov@yandex.ru      Важная роль в регуляции экспрессии генов принадлежит эпигенетическим механизмам, в т.ч. трёхмерному строению хроматина в ядре. Мезенхимные стволовые клетки (МСК) являются перспективной моделью изучения роли строения ядра в процессах дифференцировки, сопровождающейся значительными изменениями в экспрессии многих генов. Цель данной работы – изучение особенностей расположения хромосом в ядрах МСК на ранних и поздних пассажах культивирования МСК. Проанализировано более 400 ядер девяти культур МСК. Центромеры хромосомы 6 находятся на большем (0,68), а хромосомы 18 на меньшем (0,49) радиальном расстоянии. Гомологи каждой хромосомы лежат на различных радиальных расстояниях. Между МСК, полученными из жировой ткани и костного мозга, различий в радиальных расстояниях хромосом не выявлено. После восьмого пассажа происходит дистальное смещении центромеры хромосомы 6 (0,66 против 0,72), что может свидетельствовать о старении или спонтанной дифференцировке клеток. Ключевые слова:  хромосомная территория, строение интерфазного ядра, мезенхимная стволовая клетка | Вып. 27 | 2011 | 68–73 | pdf | ВОЗМОЖНОСТИ СТАНДАРТИЗАЦИИ КЛЕТОЧНЫХ КУЛЬТУР С ПОМОЩЬЮ МЕТОДА ГЕНОТИПИРОВАНИЯ КОРОТКИМИ ТАНДЕМНЫМИ ПОВТОРАМИ А.Ю. Маркарян, А.А.Бахарев, П.В. Устьянцев ФГУН "Екатеринбургский НИИ вирусных инфекций" Роспотребнадзора, Екатеринбург; Virus@etel.ru      Представлены результаты, полученные при анализе культур человеческого происхождения банка-музея Екатеринбургского НИИ вирусных инфекций (ЕНИИВИ). Использовали методику полимеразной цепной реакции (ПЦР) с применением моноплексов тетрамерных STR-локусов человека. Первичный анализ показал отсутствие кросс-контаминации исследованых культур, позволил уточнить генетические характеристики некоторых из них, выявить генетические различия в отдельных клонах. В результате работы установлено частичное совпадение длин амплифицированных фрагментов STR-локусов человека и культивируемых клеток африканской зеленой мартышки (линия Vero). Предполагается наличие гомологичных фрагментов геномов. Ключевые слова:  клеточные культуры, ПЦР, STR-локусы | Вып. 27 | 2011 | 74–80 | pdf | ОПРЕДЕЛЕНИЕ МИКОПЛАЗМ И ВИРУСА БЫЧЬЕЙ ДИАРЕИ В КОЛЛЕКЦИОННЫХ КЛЕТОЧНЫХ ЛИНИЯХ Р.Я. Подчерняева, Л.В. Урываев, А.В. Дедова, Л.В. Дедова, К.С. Ионова, Г.Р. Михайлова, Н.А. Парасюк, О.М. Гринкевич, Т.К. Селиванова, Т.В. Гребенникова, А.Д. Петрачев, М.Н. Щетвин ФГУ "НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского" Минздравсоцразвития России, Москва; cells@rambler.ru      В работе представлены данные по определению токсичности эмбриональных телячьих сывороток разных фирм. Контаминацию культур клеток микоплазмой определяли с помощью антибиотика оливомицина и полимеразной цепной реакции (ПЦР). Контаминацию 83 коллекционных клеточных линий вирусом бычьей диареи определяли с помощью ПЦР. Показано, что 30% исследованных линий содержат этот вирус. Ключевые слова:  культуры клеток, токсичность бычьих сывороток, контаминация, микоплазма, вирус бычьей диареи | Вып. 27 | 2011 | 80–88 | pdf |